En primer lloc, tant EcoR1 com Xba1 deixen voladissos de 5' quan digereixen l'ADN (com ho fa Nde1). En ambdós casos l'extrem 3' està encastat, per això la poliermasa pot afegir bases. En segon lloc, totes les polimerases només poden afegir bases a un extrem de 3', de manera que el Klenow afegirà 4 bases a l'extrem retrocés de 3' dels dos llocs per generar extrems roms.
Els enzims de restricció deixen un fosfat 5?
Els vectors i insercions digerides per enzims de restricció contenen les modificacions terminals necessàries (5' fosfat i 3' hidroxil), mentre que els fragments creats per la reacció en cadena de la polimerasa (PCR) poden no.
Es poden lligar els extrems roms?
Lligadura d'extrems roms
La lligadura d'extrems roms no implica l'aparellament de bases dels extrems que sobresurten, de manera que qualsevol extrem rom es pot lligar a un altre extrem. Els extrems roms es poden generar per enzims de restricció com SmaI i EcoRV.
La polimerasa Taq produeix extrems roms?
Sí… Taq Polymerase afegeix A-Overhangs si manteniu el pas d'extensió final a 72 dC a la PCR. S'utilitza principalment per a la clonació de TA.
Per què utilitzar el fragment de Klenow en la seqüenciació d'ADN?
El fragment de Klenow és extremadament útil per a tasques basades en la investigació, com ara: Síntesi d'ADN de doble cadena a partir de plantilles d'una cadena . Omplint els extrems retrocés de 3' dels fragments d'ADN per fer que el volat de 5' sigui romà . Digerir els voladissos que sobresurten de 3'.
