Un cop les cèl·lules apareguin separades, afegiu 2 volums de medi de creixement complet preescalfat per desactivar la tripsina. Disperseu suaument el medi fent pipetes sobre la superfície de la capa cel·lular diverses vegades per assegurar la recuperació del >95% de les cèl·lules.
Com puc aturar l'activitat de la tripsina?
La digestió de la tripsina es pot aturar mitjançant la congelació o baixant el pH de la reacció per sota de pH 4 afegint àcid fòrmic, acètic o trifluoroacètic (la tripsina recuperarà activitat quan la El pH augmenta per sobre del pH 4). Les mostres digerides es poden emmagatzemar a -20 °C.
Què neutralitza la tripsina?
Un tampó que conté ions de calci i magnesi també alentirà l'activitat de la tripsina. Tanmateix, l'FBS és la manera més eficaç d'inhibir l'activitat de la tripsina.
El sèrum inactiva la tripsina?
El sèrum inactiva la tripsina residual que queda de la digestió enzimàtica dels ronyons i dels enzims proteolítics sintetitzats posteriorment per les cèl·lules. Les cèl·lules recentment tripsinitzades es podrien convertir en monocapes en absència de sèrum sempre que es rentés repetidament per eliminar la tripsina residual.
Quants mitjans es necessiten per desactivar la tripsina?
Mentre utilitzeu com a mínim una proporció 1:1 de medi que conté sèrum del 5-10% amb la vostra tripsina, hi hauria d'haver una inhibició més que suficient, seguida de centrifugació i intercanvi mitjà amb mitjà fresc.
