Com més gran sigui el pes molecular, més llarga serà la bobina i més lenta serà la molècula. Per tant, electroforesi + SDS es separa en funció del pes molecular, no en funció de la càrrega nativa. Nota important: les proteïnes de la mateixa longitud normalment no es poden separar mitjançant electroforesi en gel + SDS.
Com separeu proteïnes del mateix pes molecular?
La centrifugació, l'electroforesi i la cromatografia són les tècniques més habituals per purificar i analitzar proteïnes. La centrifugació separa les proteïnes en funció de la seva velocitat de sedimentació, que està influenciada per la seva massa i forma.
Quines tècniques separen les proteïnes per càrrec?
Les proteïnes es poden separar en funció de la seva càrrega neta mitjançant la cromatografia d'intercanvi iònic. Si una proteïna té una càrrega positiva neta a pH 7, normalment s'uneix a una columna de perles que conté grups carboxilats, mentre que una proteïna carregada negativament no ho farà (figura 4.4).
Quina de les tècniques següents és més adequada per separar proteïnes en funció del pes molecular?
Els mètodes de cromatografia basats en la partició són molt efectius en la separació i la identificació de molècules petites com a aminoàcids, hidrats de carboni i àcids grassos. Tanmateix, les cromatografia d'afinitat (és a dir, cromatografia d'intercanvi iònic) són més efectives en la separació de macromolècules com àcids nucleics i proteïnes.
Quin tipus de columnala cromatografia separa les proteïnes en funció del pes molecular?
La cromatografia de filtració en gel (GF) separa les proteïnes només en funció de la mida molecular. La separació s'aconsegueix mitjançant una matriu porosa a la qual les molècules, per motius estèrics, tenen diferents graus d'accés, és a dir, les molècules més petites tenen més accés i les molècules més grans queden excloses de la matriu.