També podeu dessalar la vostra mostra mitjançant ultrafiltració fins a 1 dècima part del volum anterior, que torneu a diluir i repetiu el pas UF. El millor mètode per dessalar és dessalat mitjançant filtració en gel contra tampó de 50 mM, que la ultrafiltració (clàssica, no centrífuga).
Què és la dessalació en la purificació de proteïnes?
La dessalació s'utilitza per eliminar les sals de les solucions de proteïnes, el fenol o els nucleòtids no incorporats dels àcids nucleics o l'excés de reactius de reticulació o d'etiquetatge de proteïnes conjugades.
Com purifiqueu les proteïnes?
En la purificació de proteïnes a granel, un primer pas habitual per aïllar les proteïnes és precipitació amb sulfat d'amoni (NH4) 2SO4. Això es realitza afegint quantitats creixents de sulfat d'amoni i recollint les diferents fraccions de proteïna precipitada. Posteriorment, el sulfat d'amoni es pot eliminar mitjançant la diàlisi.
Com amortitzeu les proteïnes d'intercanvi?
L'intercanvi de tampó, però, es realitza mitjançant primer equilibrant amb la resina de columna amb el tampó on hauria d'acabar la mostra. En ambdós casos, els components del tampó que porten la mostra a la columna es substituirà per la solució amb la qual està preequilibrada la columna.
Quina de les següents tècniques de cromatografia es pot aplicar per a la dessalació de proteïnes?
Com s'ha esmentat anteriorment, filtració en gel es pot utilitzar eficaçment per a proteïnesdessalinització i s'aconsegueix equilibrant primer la columna de filtració de gel amb aigua. Tanmateix, l'intercanvi de tampó s'aconsegueix equilibrant primer la resina de columna amb el tampó objectiu.
