Els artefactes de dímer d'imprimació solen aparèixer a un nombre de cicle de llindar gran (normalment > 35 cicles), que és superior al número de cicle de llindar de l'amplicó desitjat. Els dímers del cebador augmenten notablement quan s'afegeix ADN genòmic heteròleg.
On veuríeu els dímers d'imprimació en un gel d'ADN?
En la PCR de punt final no quantitatiu, el dímer de l'imprimació apareixerà com un frotis més o menys tènue sobre un gel d'agarosa, per sota de la banda del producte d'interès.
Com es formen els dímers d'imprimació?
Els dímers d'imprimació es formen quan dos cebadors s'uneixen entre si, en comptes de l'ADN de la plantilla, a causa de les regions de complementarietat dels cebadors.
Com detecteu els dímers d'imprimació?
La manera més fàcil de comprovar si hi ha dímers d'imprimació és per comparar les teves reaccions amb el teu control negatiu (aigua en lloc d'ADN o ARN). Els dímers d'imprimació encara es formaran al control negatiu. Alguns conjunts d'imprimacions tenen més probabilitats de formar dímers que d' altres.
Per què apareixen els dímers d'imprimació?
S'observen majoritàriament dímers d'imprimació a causa de l' alta concentració de l'imprimació a la barreja de reacció de PCR. O si no hi ha amplificació per PCR i es pot veure el dímer d'imprimació al gel d'agarosa. Si podeu veure el producte de PCR, podeu reduir la concentració del primer i mantenir les altres condicions iguals.
