La tripsinització és el procés de dissociació cel·lular utilitzant tripsina, un enzim proteolític que descompon les proteïnes, per dissociar les cèl·lules adherides del vas en què s'estan cultivant. Quan s'afegeix a un cultiu cel·lular, la tripsina descompone les proteïnes que permeten que les cèl·lules s'adhereixin al vas.
Per què tripsinitzem les cèl·lules?
La
La tripsinització es fa sovint per permetre el pas de les cèl·lules a un nou contenidor, l'observació per a l'experimentació o la reducció del grau de confluència en el matràs mitjançant l'eliminació d'un percentatge de les cel·les.
Com funciona la tripsina per separar cèl·lules?
Trypsin/EDTA és un mètode combinat per separar cèl·lules. La tripsina talla les proteïnes d'adhesió en les interaccions cèl·lula-cèl·lula i matriu cèl·lula tallant l'aminoàcid de les proteïnes d'adhesió específicament a la lisina o aginina a l'extrem C-terminal si l'aminoàcid aigües amuntno és prolina.
Com s'obtenen cèl·lules adherents tripsinitzades?
Procediment
- Retireu el medi del recipient de cultiu per aspiració i rentar la monocapa amb una solució de sal lliure de Ca2+ i Mg 2+ per eliminar tots els rastres de sèrum. …
- Dispenseu prou tripsina o solució de tripsina/EDTA als recipients de cultiu per cobrir completament la monocapa de cèl·lules i col·loqueu-los a una incubadora a 37 °C durant ~2 minuts.
Com puc desactivar la tripsina en cultiu cel·lular?
Un cop apareguin les cel·les separades, afegiu 2 volumsde medis de creixement complets preescalfats per inactivartripsina. Disperseu suaument el medi fent pipetes sobre la superfície de la capa cel·lular diverses vegades per assegurar la recuperació del >95% de les cèl·lules. Per a cultius sense sèrum, inhibidor de tripsina de soja (núm. de producte
